En quines àrees s'aplica la prova de PCR

La biologia molecular es considera tecnologia d'avantguarda en el camp actual de la investigació mèdica, i la tecnologia de detecció 44PCR és una d'elles, que s'utilitza àmpliament en medicina clínica. La tecnologia de detecció 44PCR s'utilitza principalment per analitzar seqüències de gens i detectar l'aparició de tumors, cèl·lules canceroses i malalties genètiques. Les seves característiques són que pot detectar gens mutats en un curt període de temps, també pot rastrejar organitzacions genètiques complexes i és fàcil de combinar amb altres mètodes de prova genètica, per la qual cosa s'utilitza àmpliament en el camp de la investigació mèdica.

Aplicació de la PCR en la detecció de mutacions de gens:

1. Detecció directa per PCR de mutacions puntuals

1. Detecció directa d'eliminacions mitjançant PCR:

Quan hi ha una supressió dins d'un gen, es poden dissenyar un parell de cebadors a ambdós costats del fragment eliminat mitjançant la seqüència d'ADN coneguda del gen i es sotmet el producte a una electroforesi en gel d'agarosa i es tenyeix amb bromur d'etidi.

1. Detecció de deleció mitjançant un parell de cebadors PCR Si la seqüència d'ADN d'un gen és clara i el lloc de deleció és relativament fixat, es poden sintetitzar un parell de cebadors adequats a ambdós costats del fragment de deleció segons la seqüència d'ADN de la regió de deleció per a la PCR. ve llum ultraviolada Aquest mètode és la manera més ràpida de detectar les supressions de fragments de gens.

2. Falta la detecció de PCR multiplex amb múltiples parells d'encebadors.

3. Detecció de pèrdua d'heterozigositat mitjançant tecnologia PCR.

2. Detecció directa de PCR de desplaçament alcalí únic

1. Detecció directa de canvis en els llocs d'escissió de l'endonucleasa de restricció - Anàlisi enzimàtica del producte PCR.

2. PCR específica de 3', sistema de mutació de bloqueig d'amplificació i PCR específica d'al·lel.

3. 3.Seqüenciació directa de PCR.

4. Hibridació de punts amb sonda PCR-oligonucleòtid (PCR-ASb).

2. Cribratge ràpid de gens mutants mitjançant tecnologia PCR

Els mètodes esmentats anteriorment poden detectar directament el lloc de la mutació, i el requisit previ és que la naturalesa i la ubicació de la mutació han de ser clares. Tanmateix, en molts casos, el lloc de la mutació del gen no està fixat i la naturalesa no és molt clara, per tant, es necessiten mètodes de cribratge ràpids i senzills per determinar si hi ha una mutació gènica en la mostra. i malalties genètiques.

1. Polimorfisme de conformació de cadena única PCR

(ii) Detecció de mutacions gèniques mitjançant electroforesi en gel de gradient desnaturalitzant (DGGE), electroforesi en gel a temperatura constant (CGGE) i temperatura (TGGE).

En resum, hi ha moltes tecnologies de detecció de mutacions gèniques basades en la tecnologia de PCR, i cadascuna té els seus propis avantatges i desavantatges, però les més utilitzades són la seqüenciació directa del cicle PCR-SSCP, PCR-ASO i la seqüenciació directa del cicle de PCR.