Què és l'acetilglucosaminidasa?

L'acetil glucosaminidasa és un marcador sensible per detectar danys renals i túbuls renals. També es pot utilitzar per comprovar si hi ha infeccions del tracte urinari i el diagnòstic precoç de la nefropatia diabètica. La seva importància clínica sol aparèixer en condicions patològiques. Si altres proves són normals i el nivell d'acetil glucosidasa és alt, es recomana una dieta baixa en sal, baixa en greixos i alta en vitamines i deixar de fumar. A continuació, fem una ullada més de prop al paper de l'acetil glucosamidasa, a què hem de prestar atenció i com comprovar-ho.

Valors normals de la prova de β-N-acetilglucosaminidasa

1. Mètode colorimètric de p-nitrofenol: NAG sèric 21,54±6,4U/L, NAG d'orina mostrava una distribució normal, la mediana era de 9.13U/g de creatinina i el límit superior del percentil 95 era de 16.10U/g de creatinina.

2. Espectrofotometria de fluorescència:

Sèrum adult: 9,94±2,07U/L.

Orina adulta: 6,39±3,19U/LCre.

El paper de la prova de β-N-acetilglucosaminidasa

Les mesures de l'activitat del NAG en sang i orina són més sensibles a les lesions del parènquima renal, especialment lesions agudes i lesions actives, i s'utilitzen principalment per controlar el dany renal precoç i l'observació de malalties.

1. Malaltia tubular renal Els metalls pesants (mercuri, plom, cadmi, etc.) i el dany renal induït per fàrmacs, isquèmia, hipòxia, pèrdua de sang, xoc, etc. poden provocar un augment de l'activitat del NAG.

2. En pacients amb síndrome nefròtica, el NAG urinari sovint augmenta significativament, disminueix durant la remissió i augmenta ràpidament durant la recaiguda, per la qual cosa es pot utilitzar com a indicació per a l'observació clínica. Els canvis en la fase aguda de la glomerulonefritis són grans, però en comparació amb la lesió tubular, els canvis són menors.

3. Diagnòstic de localització de la infecció del tracte urinari: NAG d'orina elevat en pielonefritis aguda i crònica pot distingir-lo de la cistitis simple. Es pot utilitzar per al diagnòstic de la infecció precoç del tracte urinari superior.

4. Monitorització del rebuig del trasplantament renal: el NAG pot augmentar en les primeres etapes del rebuig del trasplantament renal i és més sensible que la proteïna de l'orina, la creatinina sèrica i l'eliminació de la creatinina.

5. Diagnòstic precoç de la nefropatia diabètica: un NAG elevat d'orina en la nefropatia diabètica és millor que l'albúmina d'orina i la β2-microglobulina per al diagnòstic precoç de la malaltia.

Possibles malalties amb resultats elevats de β-N-acetilglucosaminidasa: síndrome nefròtica, infecció del tracte urinari

Què s'ha de prestar atenció a la prova de β-N-acetilglucosaminidasa

(1) Mètode colorimètric de p-nitrofenol:

① La matriu p-nitrofenol s'ha de purificar i assecar a 50 ℃ durant 24 hores abans de la preparació. Utilitzeu 10 mmol/L de NaOH per fer la concentració de 0,04 mmol/L i escanegeu la corba d'absorció amb un espectrofotòmetre d'ample de banda estret, λmax = 401 nm, segons els estàndards IFCC, Aλmax = 0,7316~0,7388, Eλmax = 18380±90).(25℃).

② El substrat té poca solubilitat quan es prepara, primer s'ha d'ajustar a una pasta amb una quantitat adequada de tampó de pH 4,6 i, a continuació, s'ha d'afegir gradualment a la quantitat necessària.

③ Quan el resultat de la mesura supera el rang lineal, la mostra s'ha de diluir amb solució salina fisiològica i tornar a mesurar, i el resultat s'ha de multiplicar pel factor de dilució.

④ La concentració de l'enzim urea es veu molt afectada pel volum d'orina, de manera que s'ha de recollir el volum d'orina de 24 hores. Si la taxa d'excreció de l'enzim es calcula mitjançant la proporció de creatinina NAG/g, no es veurà afectada per la concentració o la dilució de l'orina i no cal retenir l'orina durant 24 hores.

(2) Espectrofotometria de fluorescència:

① Hi ha un kit de prova de producció nacional per mesurar el NAG mitjançant el mètode de fluorescència, que és molt sensible i no està afectat pel color de l'orina.

② També podeu utilitzar el fotòmetre de fluorescència 930 produït per Shanghai Third Analytical Instrument Factory, amb un filtre d'excitació de 360 ​​i un filtre d'emissió de compost (400 + 450), amb resultats satisfactoris.

③ La concentració de cada component a la solució de reacció enzimàtica d'aquest mètode és: substrat 1,33 mmol/L, àcid cítric 20 mmol/L, Na2HPO4 32 mmol/L.

④ El dissolvent utilitzat per preparar els reactius ha de ser aigua destil·lada doble, el substrat no ha de contenir 4-MU lliure i l'enzim ha d'estar absent en BSA o inactivat escalfant-se a 50 ° C durant 2 hores.

⑤ NAG en sèrum és estable a 4 °C durant diverses hores a diversos dies i a -20 °C durant diversos mesos. Les mostres d'orina són estables a 4 °C durant 1 setmana i també es poden tractar amb plasma anticoagulat amb citrat.

⑥ La β-N-acetilglucosamina es pot hidrolitzar per dos enzims, un és la β-N-acetilglucosamina sidasa (EC 3.2.1.30) i l'altre és la β-N-acetilglucosidasa (EC 3.2.1.52 Només l'enzim purificat es pot limitar a EC 3.2.1.33.2.1.33. En sentit estricte, NAG, que sovint es fa referència a la literatura domèstica, rep el nom del substrat utilitzat, en lloc de fer referència a l'especificitat de l'enzim per al substrat. Per tant, actualment la literatura estrangera sovint s'hi refereix com a β-N-acetilglucosaminidasa.

Mètodes per a la prova de β-N-acetilglucosaminidasa

(1) Mètode colorimètric p-nitrofenol: barregeu la mescla a una longitud d'ona de 405 nm, un recorregut de la llum d'1 cm i ajusteu la llum a zero amb aigua destil·lada Llegiu l'absorbància de cada tub i utilitzeu la diferència (AU - AC) per comprovar la corba estàndard.

① La matriu p-nitrofenol s'ha de purificar i assecar a 50 ℃ durant 24 hores abans de la preparació. Utilitzeu 10 mmol/L de NaOH per fer la concentració de 0,04 mmol/L i escanegeu la corba d'absorció amb un espectrofotòmetre d'ample de banda estret, λmax = 401 nm, segons els estàndards IFCC, Aλmax = 0,7316~0,7388, Eλmax = 18380±90).(25℃). Segons el coeficient d'absorció molar del p-nitrofenol

② El substrat té poca solubilitat quan es prepara, primer s'ha d'ajustar a una pasta amb una quantitat adequada de tampó de pH 4,6 i, a continuació, s'ha d'afegir gradualment a la quantitat necessària.

③ Quan el resultat de la mesura supera el rang lineal, la mostra s'ha de diluir amb solució salina fisiològica i tornar a mesurar, i el resultat s'ha de multiplicar pel factor de dilució.

④ La concentració de l'enzim urea es veu molt afectada pel volum d'orina, de manera que s'ha de recollir el volum d'orina de 24 hores. Si la taxa d'excreció de l'enzim es calcula mitjançant la proporció de creatinina NAG/g, no es veurà afectada per la concentració o la dilució de l'orina i no cal retenir l'orina durant 24 hores.

(2) Espectrofotometria de fluorescència: primer, diluïu el sèrum o l'orina 20 vegades amb una solució tampó que no contingui albúmina sèrica bovina (BSA).

Barrejar bé, establir la longitud d'ona d'excitació a 364 nm, la longitud d'ona d'emissió a 448 nm, ajustar a zero amb la solució d'aturada, ajustar la intensitat de fluorescència del tub de 6 μmol/L 4-MU a 100 i, a continuació, mesurar la intensitat de fluorescència del tub en blanc i del tub de mesura respectivament.

① Hi ha un kit de prova de producció nacional per mesurar el NAG mitjançant el mètode de fluorescència, que és altament sensible i no està afectat pel color de l'orina.

② També podeu utilitzar el fotòmetre de fluorescència 930 produït per Shanghai Third Analytical Instrument Factory, amb un filtre d'excitació de 360 ​​i un filtre d'emissió de compost (400 + 450), amb resultats satisfactoris.

③ La concentració de cada component a la solució de reacció enzimàtica d'aquest mètode és: substrat 1,33 mmol/L, àcid cítric 20 mmol/L, Na2HPO4 32 mmol/L.

④ El dissolvent utilitzat per preparar els reactius ha de ser aigua doble destil·lada, el substrat no ha de contenir 4-MU lliure i l'enzim ha d'estar absent en BSA o inactivat escalfant-se a 50 ° C durant 2 hores.

⑤ NAG en sèrum és estable a 4 °C durant diverses hores a diversos dies i a -20 °C durant diversos mesos. Les mostres d'orina són estables a 4 °C durant 1 setmana i també es poden tractar amb plasma anticoagulat amb citrat.

⑥ La β-N-acetilglucosamina es pot hidrolitzar per dos enzims, un és la β-N-acetilglucosamina sidasa (EC 3.2.1.30) i l'altre és la β-N-acetilglucosidasa (EC 3.2.1.52 Només l'enzim purificat es pot limitar a EC 3.2.1.33.2.1.33. En sentit estricte, NAG, que sovint es fa referència a la literatura domèstica, rep el nom del substrat utilitzat, en lloc de fer referència a l'especificitat de l'enzim per al substrat. Per tant, actualment la literatura estrangera sovint s'hi refereix com a β-N-acetilglucosaminidasa.

Quant costa la prova de β-N-acetilglucosaminidasa?

Categoria d'especialitat: Examen d'Urologia Categoria: Examen Bioquímic

Gènere aplicable: apte tant per a homes com per a dones, ja sigui en dejuni: dejuni

Preu de referència de la prova de β-N-acetilglucosaminidasa: 10-60 iuans