Quina és la fórmula del medi de congelació cel·lular?

Amb el desenvolupament continu de la ciència i la tecnologia, la tecnologia mèdica també millora constantment. L'incident de la congelació dels humans fa uns anys va obrir els ulls al món. Resulta que no només es poden congelar i conservar els aliments, sinó que fins i tot el cos humà es pot congelar i conservar. Si voleu aconseguir aquest objectiu, necessiteu un fluid de refrigeració cel·lular.

(I) Criopreservació cel·lular

1. Preparar un medi de cultiu congelat que contingui un 10% de DMSO o glicerol i un 10-20% de sèrum de vedella;

2. Prendre cèl·lules en fase de creixement logarítmic, treure el medi de cultiu antic i rentar amb PBS.

3. Eliminar PBS i afegir la quantitat adequada de tripsina (cobrint la superfície del plat de cultiu) per digerir la monocapa de cèl·lules;

4. Centrifugar a 1000 rpm durant 5 min;

5. Eliminar la tripsina, afegir una quantitat adequada de medi de cultiu congelat preparat, bufar suaument amb una pipeta per uniformitzar les cèl·lules, comptar i ajustar la densitat final de cèl·lules en el medi de congelació a 5×106/ml~1×107/ml;

6. Distribuïu les cèl·lules en tubs de criopreservació, 1-1,5 ml per tub;

7. Etiqueteu el nom de la cèl·lula, el temps de congelació i l'operador al tub de criopreservació;

8. Criopreservació: El procediment de crioconservació estàndard és una velocitat de refredament de -1 a -2 °C/min Quan la temperatura arriba per sota dels -25 °C, es pot augmentar a -5 °C a -10 °C/min. Quan arriba a -100 °C, es pot submergir ràpidament en nitrogen líquid. Alternativament, els criotubs que contenen cèl·lules es poden col·locar en una nevera de -20 °C durant 2 hores, després es poden col·locar en una nevera de -70 °C durant la nit, es poden treure els criotubs i col·locar-los en un recipient de nitrogen líquid.

(II) Recuperació cel·lular

1. Traieu el criovial del recipient de nitrogen líquid i submergiu-lo directament en aigua tèbia a 37 ℃, sacsejant-lo de tant en tant per fondre-lo el més ràpidament possible.

2. Traieu el criotub del bany maria a 37 ℃, obriu la tapa, xucleu la suspensió cel·lular amb una pipeta, afegiu-la al tub de centrífuga i afegiu-hi 10 vegades més medi de cultiu, barregeu bé;

3. Centrífuga, 1000 rpm, 5 min;

4. Descartar el sobrenedant, afegir medi de cultiu que conté un 10% de sèrum de vedella per resuspendre les cèl·lules, comptar, ajustar la densitat cel·lular, inocular el matràs de cultiu i cultivar en una incubadora a 37 °C;

5. Substituïu el medi de cultiu l'endemà i continueu cultivant.

Precaucions

1. Per a la criopreservació es poden utilitzar cèl·lules cultivades des de l'etapa de proliferació fins a la formació d'una monocapa densa, però es prefereixen les cèl·lules en fase de creixement logarítmic. El millor és canviar el medi de cultiu un cop al dia abans de congelar;

2. Quan col·loqueu el criotub o el traieu del recipient de nitrogen líquid, preneu mesures de protecció per evitar les congelacions;

3. El millor és utilitzar un medi de cultiu acabat de preparar per a la congelació i descongelació.