Quins són els consells per utilitzar nitrocel·lulosa?

El nitrat de cel·lulosa és un polímer blanc, en realitat té molts noms, com ara nitrat de cel·lulosa, i la seva abreviatura en anglès és NC. Aquesta substància química té moltes característiques, com que canvia de color fàcilment després d'estar exposada a la llum solar i també és fàcil de cremar.

Consells d'aplicació per a la membrana de nitrocel·lulosa:

1. Principi d'unió proteïna-membrana

El principi d'unió entre la proteïna i la membrana, les forces d'unió conegudes inclouen la força hidrofòbica, la força electrostàtica de l'enllaç H, etc. El principi d'unió exacte no està clar i es recolza principalment en hipòtesis: Hi ha dues hipòtesis principals:

1) En primer lloc, els dos es combinen per resistència electrostàtica, i després es basen en enllaços H i efectes hidrofòbics per mantenir la combinació a llarg termini.

2) En primer lloc, els dos es combinen mitjançant una interacció hidrofòbica, i després l'efecte electrostàtic s'utilitza per mantenir la combinació a llarg termini.

Ambdues hipòtesis indiquen que el procés d'enquadernació consta de dos passos: primer unió i després unió a llarg termini A causa de l'ambigüitat del principi d'unió, el treball en aquesta àrea es basa en gran mesura en l'experiència pràctica.

2. Efecte de la membrana en la unió

1) Mida dels porus de la membrana

Alguns tècnics solen utilitzar la mida dels porus de la membrana per distingir diferents membranes, però tingueu en compte que això es limita als productes del mateix fabricant, si es tracta de productes de diferents fabricants, aquesta comparació no té sentit.

A mesura que la mida dels porus de la membrana disminueix, augmenta la superfície real disponible de la membrana i també augmenta la quantitat de proteïna lligada a la membrana.

A més, com més petita sigui la mida dels porus de la membrana, més lenta serà la velocitat de cromatografia, més temps trigarà el complex marcat amb or a passar per la línia T i més completa serà la reacció.

Combinant els dos punts anteriors, la conclusió és que com més petita sigui la mida del porus de la membrana, més gran serà la sensibilitat, però, al mateix temps, també alenteix la velocitat de funcionament de la placa i augmenta la possibilitat d'unió inespecífica, és a dir, més alt és el fals positiu. Per tant, és necessari seleccionar la membrana adequada per al projecte real i trobar l'equilibri adequat.

2) Diferències de membranes de diferents fabricants

Aquesta diferència prové principalment de dos punts:

1> Quan es produeixen membranes, les fonts, tipus i quantitats de polímers i tensioactius utilitzats són diferents. De la mateixa manera, aquests dos tipus de substàncies tenen un impacte més gran en el rendiment en el processament de membranes.

2> El procés de processament és diferent.

3. Matèries primeres biològiques, reactius i formulacions de solucions tampó

1) Matèries primeres biològiques L'ús de matèries primeres biològiques per a les línies de TC varia, de manera que només es fa una breu descripció.

En primer lloc, els anticossos monoclonals s'uneixen millor a les membranes que els anticossos policlonals, principalment perquè els anticossos policlonals tenen molts llocs de superfície diferents i les condicions òptimes d'unió per a cada lloc a la membrana són lleugerament diferents, cosa que sens dubte augmenta la dificultat d'optimització.

En segon lloc, com més gran sigui el pes molecular, més difícil serà que la proteïna s'uneixi al material en fase sòlida.

2) Tampó

El que més preocupa a tothom és probablement el desig d'obtenir una fórmula amb un rendiment excel·lent, incloent tampó, solució de bloqueig i altres fórmules de solució de processament.

De fet, és impossible proporcionar una llista de fórmules universals perquè els diferents sistemes de reacció requereixen diferents fórmules, i els sistemes de reacció de diferents institucions són diferents.

La composició del tampó és generalment: PBS (o un altre sistema tampó) + substància d'acció (per a un problema específic) + ajust del PH. Després de referir-me a diversos materials anteriors, la meva opinió personal és que el principi de la fórmula hauria de ser senzill i no complicat, i que la substància d'acció s'hauria d'afegir segons les vostres necessitats.

El sistema tampó recomanat és 0,01M PBS pH 7-7,2, que té una bona adaptabilitat a una varietat d'antígens i anticossos.

Els següents són els principals factors que afecten el rendiment de la substància:

Una petita quantitat de NACL pot reduir la força del senyal i eliminar els falsos positius.

L'alcohol orgànic (metanol, isopropanol, etc.) mulla la membrana, redueix l'electricitat estàtica a la membrana i facilita la unió del recobriment, personalment no ho recomano perquè s'ha millorat el procés d'elaboració de la membrana.

Els tensioactius (TW20, TX100) poden augmentar la hidrofilicitat, evitar línies buides i millorar el color.

El sucre, un agent protector, retarda el procés d'envelliment i també pot augmentar la hidrofilicitat com l'anterior.

Ajustar el pH a una determinada posició pot eliminar els falsos positius.

4. Entorn de mostra

La humitat ambiental és molt important per al procés de deposició de la pel·lícula. La humitat òptima se situa generalment entre el 45-65%.

Quan la humitat és massa baixa, la càrrega estàtica s'acumula fàcilment a la membrana i es formen fàcilment punts dispersos a la membrana, donant lloc a taques hidrofòbiques a la prova.

Quan la humitat és massa alta, l'acció capil·lar a la membrana s'enforteix i la pel·lícula és propensa a fer que la línia CT es faci més ampla o fins i tot difusa.

Per tal d'assegurar la uniformitat de la humitat de la membrana durant la tacada de la mostra, la membrana se sol col·locar en condicions d'humitat durant un període de temps abans de la taca de la mostra.

5. Relació entre l'instrument d'observació i l'estat de la superfície de la membrana

Actualment hi ha dues maneres de detectar, el tipus de pel·lícula de ratllat i el tipus de pel·lícula de ratllat sense contacte.

Atès que el mètode de ratllat de membrana utilitza un tub suau per dibuixar l'anticòs a la superfície de la membrana, i la membrana en si és suau i trencadissa, les màquines de ratllat de membrana importades utilitzen millors materials i sistemes de control, de manera que les ratllades que queden són més lleugeres, mentre que els instruments domèstics són inferiors, de manera que les rascades que queden són més greus per a la recromatització del complex d'or. s. Al mateix temps, és fàcil tenir un fenomen estrany que aparegui una línia fina (línia fantasma) a la posició de la línia T quan s'executa la placa i la línia fantasma desapareix després d'haver acabat la placa.

6. Amplada de la membrana i posició de punt

L'amplada de la membrana és generalment de 18 mm (o 20 mm) i 25 mm, que s'utilitzen per a tires de prova i plaques de prova respectivament.

No obstant això, les diferents posicions de la línia T aportaran sensibilitats diferents. Quan la posició d'observació es mou cap amunt, la velocitat del complex marcat amb or s'alenteix, el temps de reacció augmenta i, a la inversa, la sensibilitat es pot utilitzar per canviar la sensibilitat i eliminar els falsos positius.