Quins són els mètodes per separar i purificar proteïnes?

A la vida diària, no sabem gaire sobre alguns components estructurals i de pes molecular del cos. A causa d'aquesta manca de comprensió, la gent no els reconeix, cosa que provoca alguns desacords i afecta els cossos de les persones.

Mètodes de separació

La diàlisi és un mètode que utilitza una bossa de diàlisi per separar proteïnes moleculars grans de compostos moleculars petits.

Ultrafiltració

La pressió positiva o força centrífuga s'utilitza per fer que la solució de proteïnes passi a través d'una membrana d'ultrafiltració amb un determinat tall de pes molecular per aconseguir el propòsit de concentrar la solució de proteïnes.

El mètode de precipitació que utilitza dissolvents orgànics com l'acetona i l'etanol pot destruir la capa d'hidratació de proteïnes i precipitar la proteïna a una temperatura baixa de 0 ~ 4 ℃. Sota la influència de factors adversos com l'alta temperatura ambient, els dissolvents orgànics poden provocar la desnaturalització de proteïnes.

La precipitació de sal és el procés d'afegir sulfat d'amoni, sulfat de sodi o clorur de sodi a una solució de proteïna per neutralitzar la càrrega superficial de la proteïna i destruir la membrana d'hidratació, donant lloc a la precipitació de proteïnes.

Mètode d'immunoprecipitació: utilitza la propietat dels anticossos específics per reconèixer les proteïnes antigèniques corresponents i formar complexos antigen-anticossos per separar les proteïnes antigèniques de les solucions mixtes de proteïnes.

Electroforesi: les proteïnes són partícules carregades en solucions per sobre o per sota del seu pI i poden moure's cap a l'elèctrode positiu o negatiu en un camp elèctric. La tècnica de separació de proteïnes permetent-les migrar en un camp elèctric s'anomena electroforesi. Diverses electroforesis de proteïnes importants:

Operació d'electroforesi

L'electroforesi en gel de poliacrilamida SDS s'utilitza sovint per determinar el pes molecular de les proteïnes.

L'enfocament isoelèctric és un mètode electroforètic que separa proteïnes en funció de les diferències en els seus punts isoelèctrics.

L'electroforesi en gel bidimensional és una tècnica important en la investigació de la proteòmica.

Cromatografia: Quan la solució proteica a separar (fase mòbil) passa per una substància sòlida (fase estacionària), els components proteics es distribueixen repetidament en les dues fases segons la mida de partícula, càrrega i afinitat de la proteïna a separar, i flueixen per la fase estacionària a diferents velocitats per separar les proteïnes. Filtració en gel (tamís molecular, filtració en gel; cromatografia d'exclusió): proteïnes separades en funció de la seva mida molecular.

Intercanvi iònic: la càrrega i les propietats de les proteïnes són diferents.

Bescanviador catiònic: CM-cel·lulosa

Bescanviador d'anions: DEAE-cel·lulosa

Cromatografia d'afinitat: antígen-anticòs, lligand-receptor, ions metàl·lics, biotina, etc.

Cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC): HPLC de fase inversa, HPLC d'ions, HPLC de filtració en gel

Ultracentrifugació: Separació de proteïnes en funció del seu pes molecular i forma.