Com determinar el pH òptim de l'amilasa salival

L'amilasa salival (amilasa pancreàtica) és una hidrolasa secretada per les glàndules salivals. El midó és hidrolitzat per l'amilasa a la saliva per produir dextrina i maltosa. Conèixer el pH òptim de l'amilasa salival és bo per a vostè, doncs, quin és el pH òptim de l'amilasa salival i com mesurar el pH òptim de l'amilasa salival?

En condicions d'excés de substrat, al mateix temps, a les mateixes condicions de temperatura i concentració d'enzims, la quantitat de midó consumida en el sistema de reacció propera al pH òptim és la més clara. Com més clar és el color generat pel midó restant i l'excés de solució de iode, més petita és l'absorbància. mylasa.

1. Materials i mètodes Instruments: pipetes (5mL, 1mL), tubs d'assaig, bastidors de tubs d'assaig, vas de precipitats petits, espectrofotòmetre tipus 722, caixa de temperatura constant, bombetes d'aspiració de l'oïda. Reactius: solució de iode 0,01 mol/L, fosfat d'hidrogen disòdic 0,2 mol/L, fosfat d'hidrogen disòdic, aigua dihidrogen fosfat/fosfat de sodi destil·lat 0.

2. Mètode: Al mateix temps, a la mateixa temperatura, concentració d'enzims i diferents condicions de pH, l'activitat enzimàtica és diferent, la quantitat de midó hidrolitzat és diferent i el color generat per la solució de midó restant i l'excés de iode és diferent mesurant l'absorbància a 660 nm, s'obté el rang de pH òptim de l'enzim.

Passos:

1. Obtenció de saliva: després de fer gàrgares amb aigua destil·lada, manteniu l'aigua destil·lada a la boca Després d'un temps adequat, col·loqueu l'aigua destil·lada i la saliva en un recipient preparat durant l'experiment, cal prestar atenció a la inactivació dels enzims.

2. Preparació de diferents solucions tampons de pH: Prepareu 10 ml de solucions tampons de diferents valors de pH segons la taula següent

3. Determineu la quantitat de midó (Per observar millor el canvi de color, podeu afegir una quantitat adequada d'aigua destil·lada perquè el volum total sigui igual. Barregeu bé, observeu el fenomen i seleccioneu el que tingui un canvi de color moderat i registreu-ne la quantitat.)

4. Determineu el múltiple de dilució de la solució enzimàtica (per tal d'observar millor el canvi de color, podeu afegir una quantitat adequada d'aigua destil·lada perquè el volum total sigui igual, barrejar bé, observar el fenomen i seleccionar-ne un adequat i registrar el seu múltiple de dilució.)

5. Determinació del pH òptim (ajustar a zero amb aigua destil·lada, mesurar l'absorbància A a 660 nm i, finalment, representar amb A com a ordenada i el pH com a abscissa. El valor de pH corresponent al punt més baix de la corba és el valor de pH òptim de l'amilasa salival).

De l'experiment anterior, podem concloure que 6,8 és el valor de pH corresponent al punt més baix de la corba, que és el valor de pH òptim de l'amilasa salival. No obstant això, cal tenir en compte que els resultats de la determinació de l'amilasa es veuen molt afectats pel mètode. Com determinar el pH òptim de l'amilasa salival. També hi ha diferents mètodes utilitzats en la pràctica clínica.