Assaig de lactat deshidrogenasa

Sabem que hi ha diversos enzims en la vida real. Aquests enzims poden actuar sols o interactuar entre ells i tenen un gran impacte en el nostre cos humà. No obstant això, crec que els diferents enzims tenen diferents mètodes de determinació, així que els mètodes de determinació de lactat són diferents Mètode de determinació de la lactat deshidrogenasa.

mètode:

Abans d'iniciar l'experiment, si us plau, prepareu tots els reactius amb antelació. Quan diluïu els reactius o les mostres, s'han de barrejar de manera uniforme i intenta evitar l'escuma durant la barreja. S'ha de preparar una corba estàndard per a cada prova. Si la concentració de la mostra és massa alta, diluïu-la amb diluent de mostra per tal que la mostra s'ajusti al rang de detecció del kit.

1. Addició de mostres: configureu els pous en blanc, els pous estàndard i els pous per a les mostres a provar. Afegiu 100 μl de diluent de la mostra al pou blanc i 100 μl de mostra estàndard o d'assaig als pous restants. Aneu amb compte de que no hi hagi bombolles. Afegiu la mostra al fons del pou de la placa ELISA, intenteu no tocar la paret del pou, agiteu-lo suaument per barrejar, cobrir o cobrir la placa ELISA i reaccionar a 3120 °C.

Per garantir la validesa dels resultats experimentals, utilitzeu una solució estàndard nova per a cada experiment.

2. Descarteu el líquid, assequeu-lo i no renteu-lo. Afegiu 100 μl de solució de treball d'anticossos marcats amb biotina a cada pou (prepareu 1 μl d'anticossos marcats amb biotina amb 99 μl de diluent d'anticossos marcats amb biotina, barregeu-lo suaument i prepareu-ho durant una hora abans de l'ús) i incubeu a 37 ° C durant 60 minuts.

3. Després d'incubar durant 60 minuts, descartar el líquid dels pous, eixugar, rentar la placa 3 vegades, remullar 1-2 minuts cada vegada, 350μl/pou, i eixugar.

4. Afegiu 100 μl de solució de treball d'avidina marcada amb peroxidasa de rave picant (igual que la solució de treball d'anticossos marcats amb biotina) a cada pou i incubeu a 37 °C durant 60 minuts.

5. Després d'incubar 60 minuts, descartar el líquid dels pous, eixugar, rentar la placa 5 vegades, remullar 1-2 minuts cada cop, 350μl/pou, i eixugar.

6. Afegiu 90 μl de solució de substrat a cada pou en seqüència i desenvolupeu color a 37 °C a la foscor (en un termini de 30 minuts, els primers 3-4 pous de l'estàndard tindran un degradat blau clar visible a simple vista, mentre que el gradient dels últims 3-4 pous no és evident, i el procés es pot finalitzar).

7. Afegiu 50 μl de solució de parada a cada pou per acabar la reacció (el color blau es torna groc immediatament). L'ordre d'afegir la solució de parada ha de ser el més semblant possible a l'ordre d'afegir la solució de substrat. Per tal de garantir la precisió dels resultats experimentals, la solució d'aturada s'ha d'afegir tan aviat com sigui possible després d'acabar el temps de reacció del substrat.

8. Utilitzeu un assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA) per mesurar la densitat òptica (valor DO) de cada pou en seqüència a una longitud d'ona de 450 nm. Realitzeu l'assaig en un termini de 15 minuts després d'afegir la solució de parada.

El contingut anterior ens presenta el mètode de determinació de la lactat deshidrogenasa. Crec que aquests continguts poden despertar l'interès de tothom. Crec que tothom pot determinar la lactat deshidrogenasa de manera efectiva, de manera ràpida i directa.